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酶标仪原理简介
发布时间:2018-01-08   点击次数:505次

酶标仪原理简介

 

酶标仪简介:

酶标仪即酶联免疫检测仪是酶联免疫吸附试验的专用仪器又称微孔板检测器。可简单地分为半自动和全自动2大类,但其工作原理基本上都是一致的,其核心都是一个比色计,即用比色法来进行分析。测定一般要求测试液的zui终体积在250μL以下,用一般光电比色计无法完成测试,因此对酶标仪中的光电比色计有特殊要求。

酶标仪原理:

酶标仪实际上就是一台变相光电比色计或分光光度计,其基本工作原理与主要结构和光电比色计基本相同,图示是一种单通道自动进样的酶标仪工作原理图光源灯发出的光波经过滤光片或单色器变成一束单色光,进入塑料微孔极中的待测标本该单色光一部分被标本吸收,另一部分则透过标本照射到光电检测器上,光电检测器将这一待测标本不同而强弱不同的光信号转换成相应的电信号,电信号经前置放大,对数放大,模数转换等信号处理后送入微处理器进行数据处理和计算,zui后由显示器和打印机显示结果。微处理机还通过控制电路控制机械驱动机构X方向和Y方向的运动来移动微孔板,从而实现自动进样检测过程而另一些酶标仪则是采用手工移动微孔板进行检测,因此省去了X,Y方向的机械驱动机构和控制电路,从而使仪器更小巧,结构也更简单。

微孔板是一种经事先包理专用于放置待测样本的透明塑料板,板上有多排大小均匀一致的小孔,孔内都包埋着相应的抗原或抗体,微孔板上每个小孔可盛放零点几毫升的溶液。

光是电磁波,波长100nm~400nm称为紫外光,400nm~780nm之间的光可被人眼观察到,大于780nm称为红外光。人们之所以能够看到色彩,是因为光照射到物体上被物体反射回来。绿色植物之所以是绿色,是因为植物吸收的大部分为红橙光和蓝紫光,但对绿色不吸收,反射出来,所以植物呈现为绿色。酶标仪测定的原理是在特定波长下,检测被测物的吸光值。

随着检测方式的发展,拥有多种检测模式的单体台式酶标仪叫做多功能酶标仪,可检测吸光度(Abs)、荧光强度(FI)、时间分辨荧光(TRF)、荧光偏振(FP)、和化学发光(Lum)。 

酶标仪从原理上可以分为光栅型酶标仪和滤光片型酶标仪。光栅型酶标仪可以截取光源波长范围内的任意波长,而滤光片型酶标仪则根据选配的滤光片,只能截取特定波长进行检测。

检测单位

光通过被检测物,前后的能量差异即是被检测物吸收掉的能量,特定波长下,同一种被检测物的浓度与被吸收的能量成定量关系。检测单位用OD值表示,OD是optical density(光密度)的缩写,表示被检测物吸收掉的光密度,OD=log(1/trans),其中 trans为检测物的透光值。根据Bouger-amberT-beer法则,OD值与光强度成下述关系:

E=OD=log(lo/Ι) 

其中E表示被吸收的光密度,Ιo 为在检测物之前的光强度,Ι为从被检测物出来的光强度。OD值由下述公式计算:

c为检测物的浓度       b为检测物的厚度        a为摩尔因子

在特定波长下测定每一种物质都有其特定的波长,在此波长下,此物质能够吸收zui多的光能量。如果选择其它的波长段,就会造成检测结果的不准确。因此,在测定检测物时,我们选择特定的波长进行检测,称为测量波长。

但是每一种物质对光能量还存在一定的非特异性吸收,为了消除这种非特异性吸收,我们再选取一个参照波长,以消除这个不准确性。在参照波长下,检测物光的吸收zui小。检测波长和参照波长的吸光值之差可以消除非特异性吸收。

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