过氧化氢灭菌作为一种新兴的灭菌方式，凭借杀菌效率高、易于降解等显著优势，已在制药、医疗、食品等多个行业得到广泛应用，并且正逐步替代臭氧、甲醛等传统灭菌方式。那么，这种高效且环保的灭菌方式，究竟是如何被发现的呢？1818年法国化学家泰纳尔首先发现了过氧化氢，从此之后，使用过氧化氢水溶液（俗称双氧水）进行灭菌，逐渐进入人们的日常生产生活中。1981年美国Steris公司发现过氧化氢在气态条件下比液态过氧化氢或其他灭菌方法杀灭孢子的能力强至少200倍。随后1990年汽化过氧化氢正式通过美国EPA核准，作为灭菌剂在各个工业领域运用。近年来，汽雾化过氧化氢消毒设备已成为高级别生物安全实验室关键灭菌设备，并在疫情防控、医院感染控制等多个领域中发挥着重要作用。此前，关于过氧化氢的灭菌效果，国内外对此一直争论不休。国际上将过氧化氢蒸汽的净化处理过程视为“除污染"，而不是“灭菌"，直至2024年1月8日，美国FDA将汽化过氧化氢（VHP）从既定的B类灭菌工艺更新为既定的A类灭菌工艺，意味着汽化过氧化氢的“灭菌效果"被广泛接受。

A类灭菌工艺指有较长的应用历史，有多种渠道来源的信息可证明其安全性、有效性，包括干热灭菌、环氧乙烷灭菌、湿热灭菌与辐照灭菌。

根据原理不同，过氧化氢灭菌方式主要分为三类：

第一类：汽化过氧化氢灭菌，也称干法灭菌，主要应用场景为无菌隔离器、传递舱或厂房空间灭菌验证。灭菌过程一般分为3个阶段，首先通过“闪蒸"将液态过氧化氢转化为汽态过氧化氢，直至测试区域过氧化氢饱和度不再增加，维持这一状态并持续杀灭微生物，最后引入新鲜空气，催化过氧化氢蒸汽分解为氧气和水，使用的液体过氧化氢浓度为30%～59%。

第二类：雾化过氧化氢灭菌，也叫湿法灭菌，即利用旋转气流将液态过氧化氢喷出，形成8～10µm的气溶胶扩散到实验区域，实现对微生物的杀灭，使用的液体过氧化氢浓度为5%～8%，灭菌时间一般为2h～3h，主要应用场景为高级别生物安全实验室的终末消毒及院感控制。

第三类：过氧化氢低温等离子体灭菌，应用场景为过氧化氢低温等离子体灭菌器，首先将过氧化氢液体汽化，注入到真空灭菌仓，使用射频或电能产生过氧化氢等离子体，实现灭活细菌和病毒，过氧化氢等离子体最后分解成水和氧气，使用液体过氧化氢浓度为50%～60%，灭菌时间较短，为30min～120min，在医院、医疗器械行业有广泛应用，主要是不耐热的精密医疗器械如人工瓣膜、心脏起搏器等进行快速灭菌。

过氧化氢灭菌是一个受多参数影响的过程，影响因子包括过氧化氢浓度、温度、相对湿度、饱和度等，由于这些参数不可控，用于过氧化氢灭菌效果验证的生物指示剂，没有明确标准文件来规定其D值。同时，现行的技术手段很难科学直观地确立过氧化氢灭菌的最不利条件和位置，只能在过氧化氢气体较难扩散的位置处放置足够多的生物指示剂以进行灭菌挑战。灭菌效果验证一般涉及灭菌条件确认、生物指示剂的选择及测试数量等。

2025年版USP指出，因汽化过氧化氢灭菌循环参数存在差异的情况下，需根据过往经验确认灭菌条件。若灭菌过程参数（通常是时间 ）无法杀灭生物指示剂，可对其进行调整，直至实现杀灭，以此确定灭菌的条件。

2025年版《中国药典》指出，过氧化氢蒸汽的灭菌验证的生物指示剂的挑战微生物常选择嗜热脂肪地芽孢杆菌，一般要求芽孢数下降3~6个lg值。生物指示剂可以使用各种含有玻璃、金属或塑料的不透气系统，纤维素基质具有高吸附性表面，可能会对过氧化氢浓度产生不利影响，因此这类材料不适宜作为过氧化氢生物指示剂的载体。

PDA TR34《Design and Validation of Isolators Systems for the Manufacturing and Testing of Health Care Products》中提到灭菌验证中生物指示剂的放置数量。在隔离器中，每平方米放置5~10个的生物指示剂是足够的，应将生物指示剂分散在无菌隔离器的各个位点以确认灭菌气体的扩散程度是否符合要求。